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            昆蟲細胞蛋白表達服務

            桿狀病毒表達載體系統(baculovirus expression vector system,BEVS)是當今基因工程四大表達系統之一。BEVS屬于真核表達系統,通過BEVS得到的重組病毒易于篩選、具有翻譯后修飾功能、表達外源基因的效率較高。BEVS還可以同時表達多個外源基因,在分泌蛋白生物活性的同時增加產量。因此,BEVS在科研和工業生產中通常應用于大規模重組蛋白的制備。

            實驗流程

            昆蟲細胞蛋白表達服務流程圖

            實驗步驟實驗內容
            密碼子優化及基因合成分析基因序列,優化密碼子,合成目的基因,提供載體
            重組質粒構建構建含有目的基因的載體質粒
            重組桿狀病毒載體構建將目的基因亞克隆到合適的桿狀病毒轉移載體上
            重組桿狀病毒擴大培養轉染昆蟲細胞,制備病毒貯液,空斑實驗測定病毒滴度
            表達條件優化檢測并優化表達條件(細胞株、MOI、時間溫度等)
            大規模桿狀病毒昆蟲細胞培養根據優化條件,可提供大規模細胞培養
            蛋白分析和純化通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制最終產品質量。
            通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。
            通過親和層析,離子交換,疏水及凝膠過濾等方法純化表達的重組蛋白。
            去除不需要的純化標簽。
             
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